Una Técnica de Secuenciación o de Hibridación de Leucemia

 Técnicas de Citogenética y Biología Molecular para el diagnóstico y seguimiento de la Leucemia Promielocítica (LPM)

Es un subtipo de Leucemia mieloide aguda que representa el 10 y 15% de los casos. y se da por acumulación excesiva de promielocitos en la medula osea y presenta una coagulopatía grave.

La base molecular está en la translocación cromosómica t(15;17)(q24;q21), que generan un gen de fusión anómalo denominado PML-RARA, con varios isoformas (bcr1,bcr2 y bcr3)Para su detección se ocupa diversas técnicas de biología molecular y citogenética. 

El cariotipo convencional permite observar las anomalías cromosómicas, pero tiene baja sensibilidad y requiere células en metafase lo que limita su utilidad para detectar enfermedad mínima residual (EMR). Por ello se utiliza técnicas mas sensibles como la hibridación fluorescente in situ (FISH)

Se usan ondas fluorescentes para identificar el gen de fusión PML-RARA incluso en células no en metafase. Aunque FISH es más sensible que el cariotipo y útil para diagnostico y seguimiento, puede presentar falso negativo y no sustituye la PCR

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REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 

1. María A, Kalia LS, Carmen A, María A, Kalia LS, Carmen A. Técnicas de citogenética y biología molecular para el diagnóstico y seguimiento de la leucemia promielocítica. Revista Cubana de Hematología, Inmunología y Hemoterapia [Internet]. 2021 [cited 2025 Jun 14];37(3):-. Available from: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0864-02892021000300004

Una Prueba de PCR para SARS-CoV-2

 Optimización del control interno de la calidad de RT-PCR en tiempo real para detección cualitativa de SARS-CoV-2

La detección molecular del SARS-Cov-2, es fundamental para el diagnostico y control de la pandemia., que se ocupo la RT-CPR en tiempo real es la prueba molecular estándar. Se utilizan muestras biológicas respiratorias, como Hisopados nasofaríngeos y orofaríngeos para diagnosticar infección especialmente en los primero días de síntomas o tras contacto con casos positivos

La extracción del ácido nucleico viral, generalmente ARN viral, se realiza mediante kits especializados para garantizar la pureza y la calidad del material. Que se usan controles negativos específicos para detectar inhibición o errores en la extracción 

La técnica empelada es la RT-PCR (tiempo real) permite amplificar genes específicos del virus en especial el gen N y el ORF1ab-  (FTD-SARS-CoV-2 de Siemens) transformando el ARN viral en ADN complementario

El resultado obtenido son Cualitativos, indicando la presencia o ausencia del virus en la muestra, pero los valores de umbral del ciclo (Cq) puede aportar información semicuantitativa sobre la carga viral ( debido a su alta sensibilidad y especificidad )

Pasos para realizar el RT-PCR

• Toma de muestra: Recolección
• Alicuotado: Preparación y distribución 
• Extracción de ARN viral: Aislamiento 
• Preparación del master mix: Mezcla 
• Amplificación del material genético
• Lectura e interpretación del resultado: Obtención del resultado
• Entrega del resultado: Resultado final

Referencias Bibliográficas

1. Torres-Gamarra G, Torres-Gamarra G. Optimización del control interno de calidad de RT-PCR en tiempo real para detección cualitativa de SARS-CoV-2. Revista del Cuerpo Médico Hospital Nacional Almanzor Aguinaga Asenjo [Internet]. 2023 [cited 2025 Jun 7];16(1):71–7. Available from: http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2227-47312023000100009

Una técnica de secuenciación para el Virus de la Hepatitis B

Técnica de secuenciación para el Virus de la Hepatitis B (VHC)

Es una enfermedad viral que puede causar cirrosis hepática u carcinoma hepatocelular. (VHC) es un virus de ARN con alta heterogeneidad genética, lo que complica su diagnostico y tratamiento.

Para la genotipificación del VHC, se utiliza la técnica de transcripción reversa seguida de PCR anidad dirigida a la región 5´ no codificante, seguida del análisis por fragmentos de restricción (RFLP) o secuenciación directa 

La secuenciación bidireccional de la región NS5B es el estándar para determinar genotipos y subtipos virales, incluyendo 1a y 1b, lo cual, permiten identificar variaciones genéticas para el manejo clínico.

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Referencias Bibliográficas 

1. Venegas M, Torres C, Urzúa A, Brahm J. Distribución nacional y regional de genotipos del virus hepatitis C en Chile. Revista chilena de infectología [Internet]. 2013 Oct 1 [cited 2025 Jun 1];30(5):566–8. Available from: https://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0716-10182013000500017